Phương Pháp Pha Loãng Mẫu – Tại Sao Phải Pha Loãng Mẫu – H2TECH

Phương Pháp Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp – Tại Sao Phải Pha Loãng Mẫu

 

Pha loãng mẫu nối tiếp là một bước không thể thiếu trong định lượng vi sinh vật cho cả mẫu lỏng và rắn. Hầu hết các mẫu có quá nhiều số lượng vi sinh vật, cần phải pha loãng liên tục để có thể định lượng chính xác. Mục tiêu của phương pháp này là để xác định số lượng vi khuẩn, nấm, và virut.

Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp Là Gì ? Định Nghĩa Pha Loãng Nối Tiếp

Như thuật ngữ chỉ ra, đó là một loạt các pha loãng liên tiếp được thực hiện để tạo ra dung dịch ít đậm đặc hơn từ dung dịch đậm đặc, hoặc đậm đặc cao. Pha loãng nối tiếp liên quan đến việc thực hiện một loạt các bước pha loãng liên tục và có trình tự để chuyển đổi dung dịch đậm đặc thành nồng độ hữu dụng hơn.

Nói một cách đơn giản, Pha loãng nối tiếp là một kỹ thuật trong phòng thí nghiệm, trong đó quy trình pha loãng được thực hiện từng bước trên một dung dịch có hệ số pha loãng tương ứng. Trong phòng thí nghiệm, phương pháp này được sử dụng để giảm số lượng tế bào trong môi trường nuôi cấy nhằm đơn giản hóa thao tác.

Trong quá trình pha loãng nối tiếp, số lượng hoặc mật độ tế bào giảm dần khi hệ số tăng lên trong mỗi bước. Điều này giúp tính toán số lượng tế bào trong dung dịch chính dễ dàng hơn bằng cách tính tổng độ pha loãng trên toàn bộ chuỗi.

Mục tiêu chính của pha loãng nối tiếp là giảm nồng độ của một chất, điển hình là mẫu hóa học hoặc sinh học, theo một loạt các bước. Kỹ thuật này được sử dụng trong nhiều quy trình phòng thí nghiệm, bao gồm các thí nghiệm vi sinh và hóa sinh, để đo chính xác nồng độ của mẫu và chuẩn bị các dung dịch có nồng độ đã biết. Ngoài ra, nó có thể được sử dụng để thu được phép đo chính xác về quần thể vi khuẩn hoặc vi sinh vật khác trong một mẫu và để phân lập các vi sinh vật nuôi cấy thuần khiết khỏi các quần thể hỗn hợp.

Robert Koch được ghi nhận là người đã khám phá ra phương pháp đếm vi sinh vật, phương pháp này ban đầu được sử dụng để nghiên cứu chất lượng nước. Năm 1883, ông xuất bản bài báo Phương pháp phát hiện vi sinh vật trong nước. Số đếm đĩa chuẩn là một phương pháp đáng tin cậy để xác định số lượng vi khuẩn và nấm.

Một loạt các độ pha loãng nối tiếp được tạo ra và một mẫu của mỗi mẫu được thêm vào môi trường thạch hóa lỏng trước khi môi trường này được đổ vào đĩa petri. Thạch đông lại, bẫy các tế bào vi khuẩn trong ma trận của nó. Các khuẩn lạc phát triển bên trong thạch, cũng như trên bề mặt và bên dưới thạch (giữa thạch và đĩa dưới).

Mục Đích Của Việc Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp ?

Mục đích chính của phương pháp này là tìm ra nồng độ hoặc số lượng tế bào của một mẫu ẩn danh bằng cách đếm số lượng khuẩn lạc được nuôi cấy từ các độ pha loãng nối tiếp của mẫu.

Nó cũng được sử dụng để tránh phải hút một lượng dung dịch rất nhỏ (1-10 µl) để pha loãng. Các đĩa đã ủ từ dung dịch pha loãng nối tiếp tạo ra một số lượng khuẩn lạc có thể đếm được dễ dàng, do đó chúng ta có thể dễ dàng liệt kê số lượng tế bào khả thi có trong mẫu.

Ứng Dụng Của Phương Pháp Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp

Pha loãng mẫu nối tiếp là phương pháp được sử dụng để giảm nồng độ của một chất trong dung dịch bằng cách pha loãng nhiều lần với dung môi. Nó thường được sử dụng trong nhiều ứng dụng, bao gồm:

1. Thử nghiệm trong phòng thí nghiệm: Pha loãng nối tiếp thường được sử dụng trong môi trường phòng thí nghiệm để chuẩn bị các mẫu có nồng độ đã biết của một chất, chẳng hạn như mẫu hóa học hoặc sinh học. Nó đặc biệt hữu ích khi làm việc với các dung dịch có nồng độ cao, vì nó cho phép chuẩn bị các dung dịch loãng được đo chính xác hơn.
2. Kiểm soát chất lượng: Pha loãng nối tiếp thường được sử dụng trong các phòng thí nghiệm kiểm soát chất lượng để chuẩn bị mẫu cho thử nghiệm. Ví dụ: một công ty dược phẩm có thể sử dụng phương pháp pha loãng nối tiếp để chuẩn bị các mẫu thuốc để kiểm tra độ tinh khiết hoặc hiệu lực của thuốc.
3. Phân tích môi trường: Pha loãng nối tiếp được sử dụng trong phân tích môi trường để chuẩn bị mẫu để kiểm tra nồng độ chất gây ô nhiễm trong nước hoặc đất. Ví dụ, một cơ quan chính phủ có thể sử dụng phương pháp pha loãng nối tiếp để chuẩn bị các mẫu nước từ hồ hoặc sông để kiểm tra nồng độ chất ô nhiễm.
4. Xét nghiệm y tế: Pha loãng nối tiếp được sử dụng trong các phòng thí nghiệm y tế để chuẩn bị các mẫu để kiểm tra nồng độ của các chất khác nhau trong cơ thể, chẳng hạn như hormone, enzym hoặc độc tố. Ví dụ: phòng thí nghiệm bệnh viện có thể sử dụng phương pháp pha loãng nối tiếp để chuẩn bị mẫu máu của bệnh nhân để kiểm tra nồng độ glucose.

Nhìn chung, pha loãng nối tiếp là một kỹ thuật được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực khác nhau để chuẩn bị các dung dịch pha loãng được đo chính xác của các chất.

Quy Trình Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp 

Sau đây là quy trình pha loãng mẫu nối tiếp đến hệ số pha loãng 10^-6:

1. Lấy 7 ống nghiệm vô trùng và sạch.
2. Mẫu đã chọn được lấy vào một ống nghiệm và 6 ống nghiệm còn lại được đổ đầy 9 ml dung dịch pha loãng vô trùng như nước cất hoặc nước muối 0,9%.
3. Lấy một pipet vô trùng, và hút 1ml mẫu vào ống nghiệm, và trộn đều.
4. Sau đó chuyển 1ml mẫu này vào ống nghiệm đầu tiên để tạo thành tổng thể tích 10ml. Nó cung cấp độ pha loãng ban đầu là 10^-1. Đảm bảo trong quá trình chuyển, đầu pipet không chạm vào thành ống nghiệm hoặc không còn lượng mẫu ở thành ống.
5. Trộn đều mẫu với chất pha loãng bằng cách lắc ống.
6. Bây giờ, hãy loại bỏ đầu pipet và thêm một đầu pipet mới vào pipet.
7. Chuyển 1 ml mẫu hỗn hợp từ độ pha loãng 10^-1 sang ống thứ hai bằng pipet. Ống thứ 2 lúc này có tổng hệ số pha loãng là 10^-2.
8. Lặp lại bước 7 cho các ống còn lại, chuyển 1 ml từ ống trước sang 9 ml dung dịch pha loãng tiếp theo.
9. Mẫu pha loãng cho vi khuẩn/tế bào sống trong ống nghiệm cuối cùng sẽ là 10^-6 (1 trên 1.000.000).

Hạn Chế Của Kỹ Thuật Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp

Nếu xảy ra một lỗi trong quá trình pha loãng mẫu, thì lỗi này sẽ được truyền đi đến các mẫu pha loãng tiếp theo. Điều này dẫn tới, mẫu loãng nhất sẽ có nhiều lỗi nhất, và độ chính xác thấp nhất.

Nó được thực hiện theo cách từng bước, do đó nó cần một khoảng thời gian dài hơn, điều này hạn chế khả năng của phương pháp.

Kỹ thuật này chỉ làm giảm số lượng vi khuẩn/tế bào sống chứ không tách chúng ra như trong các phương pháp khác như tế bào học dòng chảy.

Ưu Điểm Của Phương Pháp Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp 

Nó có thể giúp giảm số lượng của các tế bào khả thi xuống nồng độ thấp hơn, và có thể sử dụng được.

Một lượng vi khuẩn nhất định được loại bỏ với mỗi độ pha loãng.

Số lượng khuẩn lạc được nuôi cấy từ các độ pha loãng nối tiếp của mẫu thử được tính để tính nồng độ của một mẫu chưa xác định. Sau đó truy ngược các phép liệt kê đã đo đến nồng độ không xác định.

Ví Dụ Về Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp 

Một ví dụ đơn giản về pha loãng mẫu nối tiếp là trong cuộc sống hàng ngày, chúng ta pha cà phê hoặc trà hàng ngày. Trong cà phê, chúng tôi đổ một ít cà phê ép lạnh và sau đó thêm nước để có được nồng độ cà phê mong muốn.

Một trường hợp khác của pha loãng nối tiếp là pha loãng bazơ và axit trong hóa học để đạt được nồng độ thích hợp.

Trong phòng thí nghiệm, việc pha loãng dịch cấy được sử dụng để xác định số lượng vi khuẩn trong mẫu bằng cách đặt đĩa là một ví dụ quan trọng khác đối với pha loãng nối tiếp.

Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp 10 Lần Là Gì ?

Độ pha loãng gấp mười lần làm giảm một lượng vi sinh vật trong dịch hoặc huyền phù theo tỷ lệ một phần mười, tương đương với một phần mười nồng độ mà tại đó nó được tìm thấy ban đầu. Một chuỗi pha loãng mười lần được gọi là pha loãng nối tiếp mười lần.

Ví dụ:

Trong sách hướng dẫn này, các dung dịch pha loãng nối tiếp mười lần được sử dụng trong các chuẩn độ huyền phù của vi rút gây bệnh Newcastle để xác định mức độ lây nhiễm. Các xét nghiệm được tiến hành trong các ống nghiệm vô trùng nhỏ. Các ống này thường được làm bằng thủy tinh và nên có nắp đậy vừa vặn để hạn chế nguy cơ nhiễm bẩn khi hòa tan.

Các Bước Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp 10 Lần 

1. Sử dụng micropipette để phân tán khoảng 900mL dung dịch pha loãng vào ống thủy tinh.
2. Sử dụng micropipette để chuyển 100mL dung dịch mẫu vào giếng đầu tiên, và trộn hỗn hợp này bằng cách lắc tay hoặc sử dụng máy trộn xoáy.
3. Giếng có mẫu hiện có 100mL dung dịch thử nghiệm ban đầu, đã được pha loãng 1/10 để tạo ra một lượng tổng thể là 1000mL.
4. Đặt các ống nghiệm thủy tinh đã khử trùng lên giá. Dán nhãn rõ ràng cho từng ống nghiệm để đánh dấu lượng chất pha loãng sau khi quá trình pha loãng nối tiếp mười lần hoàn tất.

Pha Loãng Mẫu Nối Tiếp 2 Lần 

Pha loãng gấp đôi làm giảm nồng độ của dung dịch xuống hai lần, làm giảm một nửa nồng độ ban đầu.

Ví dụ:

Các bước của 1 lần pha loãng mẫu nối tiếp 2 lần

1. Sử dụng micropipette để phân tán 25mL chất lỏng pha loãng PBS vào giếng đầu tiên.
2. Sử dụng micropipette để chuyển 25mL dung dịch mẫu thử vào giếng đầu tiên.
3. Sử dụng micropipette để trộn bằng cách hút chất lỏng rồi đẩy ra ngoài. Lặp lại thủ tục này hai lần.
4. Dung dịch mẫu thử hiện chứa 25 mL từ dung dịch mẫu thử ban đầu, đã được pha loãng một nửa trong tổng thể tích 50 ml.

Các bước pha loãng mẫu nối tiếp 2 lần

1. Sử dụng micropipette để phân tán 25mL dung dịch pha loãng PBS vào tất cả các giếng liên tiếp trên đĩa microwell.
2. Sử dụng micropipette để chuyển 25mL dung dịch thử vào lỗ ban đầu và trộn. Đây là pha loãng hai lần ban đầu.
3. Sử dụng cùng một đầu của micropipette để thực hiện phép giãn nở hai lần thứ hai.
4. Tiếp tục pha loãng gấp đôi cho đến giếng cuối cùng trên tấm microwell. Giếng cuối cùng đóng vai trò là giếng kiểm soát.

Mua Máy Pha Loãng Mẫu Ở Đâu ?

Công ty CP thiết bị khoa học H2TECH cung cấp các dòng máy pha loãng mẫu, máy pha loãng mẫu tự động, thiết bị pha loãng mẫu,… giúp bạn thực hiện các phép đo chính xác, an toàn, hiệu quả và thành công. Là một trong những nhà phân phối tại Việt Nam, với nhiều hãng nỗi tiếng khác nhau trên thế giới như IUL, INTERSCIENCE, … Nếu bạn đang có nhu cầu về các loại máy pha loãng mẫu,… hoặc thiết bị vi sinh phòng thí nghiệm hãy liên hệ với H2TECH để nhận được giá tốt nhất thị trường.

Thiết Bị Pha Loãng Mẫu Tự Động INTERSICENCE DiluFlow 3 Kg 

• DiluFlow® là thiết bị pha loãng mẫu rắn trong vài giây, với trọng lượng chất pha loãng thích hợp. Có sẵn trong máy bơm đơn hoặc đôi.
• Máy pha loãng mẫu và cân mẫu DiluFlow là máy pha loãng và cân trọng lượng để pha loãng mẫu trước khi phân tích vi sinh. Tuân thủ các tiêu chuẩn ISO 7218, ISO 6887-1 và FDA BAM.

Máy Pha Loãng Mẫu IUL SMART DILUTOR W

• Máy pha loãng mẫu IUL SMART DILUTOR W là giải pháp cho các phòng thí nghiệm đang tìm kiếm khả năng xử lý đầy đủ và khả năng truy xuất nguồn gốc trong pha loãng trọng lượng hoặc phân phối chất lỏng. Thiết bị này đảm bảo độ chính xác, tốc độ, tính vô trùng khi xử lý mẫu và theo dõi chi tiết các quy trình.
• Tế bào cân chính xác và bơm nhu động mạnh mẽ của nó cung cấp khả năng pha loãng trọng lượng/phân phối chất lỏng được tối ưu hóa cho các phòng thí nghiệm kiểm soát chất lượng thực phẩm, dược phẩm và mỹ phẩm. Các mẫu được cho vào bên trong các túi vô trùng được giữ bởi giá đỡ đảm bảo vô trùng. Smart Dilutor W cân các mẫu và phân phối một lượng canh thang chính xác, pha loãng mẫu thành hệ số pha loãng có thể định cấu hình (số hữu tỷ). Các mẫu hiện đã sẵn sàng để được đồng nhất để thử nghiệm thêm.

Chúng tôi cam kết:

• 100% tất cả các thiết bị được nhập khẩu chính hãng, có đầy đủ giấy tờ, hóa đơn chứng minh nguồn gốc.
• Được bảo hành chính hãng và hướng dẫn sử dụng các thiết bị chi tiết.
• Cam kết hỗ trợ kỹ thuật 24/7 khi khách hàng có nhu cầu
• Có đội ngũ chuyên viên kỹ thuật kiểm nghiệm chuyên môn cao, giúp khách hàng yên tâm trong quá trình sử dụng thiết bị.

Xem Thêm 

• IUL – Công ty sản xuất thiết bị cho phòng thí nghiệm vi sinh.
• INTERSCIENCE – 40 năm kinh nghiệm về thiết bị vi sinh.
• Máy đếm khuẩn lạc – Lợi ích của máy đếm khuẩn lạc tự động.
• Thiết kế phòng thí nghiệm vi sinh.
• 2 phương pháp khử khuẩn hàng đầu – So sánh UV-C và HPV.

Tham Khảo Các Dòng Máy Pha Loãng Mẫu Tại Đây